个性有点胆小的路易吉
在鬼怪栖息的洋楼中展开冒险
拥有神秘力量的「暗月」悬浮在「鬼怪溪谷」的夜空之中。
鬼怪研究家「哎唷‧喂博士」在这个地方和快活爽朗的鬼怪们一起过着和睦的生活。
然而某一天，一个黑影却在稍稍靠近......
暗月遭到害羞幽灵王破坏，变得四分五裂。
这时鬼怪溪谷里冒出了诡异的雾气，鬼怪们突然失去控制......！

被哎唷‧喂博士强行召来的路易吉，
为了搜集四散的暗月碎片，于是在鬼怪溪谷展开了调查。
究竟路易吉能否让鬼怪溪谷回复平静......？

还有从塔的底层出发，以顶层为目标迈进的模式——「恐怖高塔」，可供最多4人一起进行协力游玩。
除了线上游玩之外，亦可透过邻近主机通讯连接最多4人一同游玩。